四千金媽 說:
最近實驗如何
四千金爸 說:
protoplast還ok 只是像上次跟妳說的那樣 14-3-3:NR interaction 還是沒看到 但是14-3-3 homodimerization倒是都有
四千金爸 說:
後來Thomas提醒了我 14-3-3:NR interaction 有一些條件要符合，所以可能是條件還沒抓到 說不定protoplast不太適合
四千金媽 說:
14-3-3:NR interaction & homodimerization 差別在哪 抱歉不懂
四千金爸 說:
NR 是 nitrate reductase, 14-3-3和NR結合後會抑制它的活性
四千金爸 說:
可是阿拉伯芥有12個14-3-3 isoforms; 2個NR, 目前不清楚是不是所有14-3-3 isoform 都會有調節NR的作用
四千金爸 說:
所以我的實驗就是希望能回答這個問題囉
四千金爸 說:
另外 14-3-3在細胞中以dimer
四千金爸 說:
形式存在
四千金爸 說:
已經有人用同樣的方法證明菸草的14-3-3會形成homodimer
四千金爸 說:
就是自己跟自己結合啦
四千金媽 說:
所以你說14-3-3:NR interaction還是沒看到 是指目前不能證實 與任何NR結合的證據
四千金爸 說:
從目前的結果看是這樣
四千金爸 說:
但我們認為是條件不對所以沒看到
四千金媽 說:
但dimer形成的條件不高喔 為何每個都有
四千金爸 說:
可能喔 目前測了四種14-3-3都有
四千金媽 說:
那測了幾個NR?
四千金爸 說:
文獻說 NR要先phosphorylation, 14-3-3才會bind
四千金爸 說:
2個NR都測了 測了3種14-3-3 都沒有
四千金媽 說:
所以還有9種14-3-3 * 2種NR = 18個實驗組
四千金爸 說:
嗯
四千金媽 說:
會不會這18組其中就有成功
四千金爸 說:
是有可能啦 測完才知道 不過我感覺不太樂觀
四千金媽 說:
做完才安心阿
四千金爸 說:
嗯 會繼續做
四千金爸 說:
等菸草長大後 會在菸草上試試看
四千金媽 說:
Thomas 很高興最近一直有 有效DATA吧
四千金爸 說:
三不五時問一下有沒有新的data
四千金媽 說:
你應該也很有衝勁吧
四千金媽 說:
所以這些DATA出來後就可以出一篇PAPER嗎
四千金爸 說:
算是吧 不過不會高興太多 太早
四千金爸 說:
如果有好的data
四千金媽 說:
菸草什麼時候長大
四千金爸 說:
再3周吧
四千金爸 說:
不過這段時間會一直做protoplast
四千金爸 說:
比較快
四千金爸 說:
只要有植物 DNA夠就很快
四千金媽 說:
若順利 菸草實驗要多久做完
四千金爸 說:
嗯 不容易估 要看有多少interaction要做
四千金爸 說:
Thomas跟我說過 做14-3-3 dimerization 應該可以先出一篇小paper
四千金媽 說:
真的喔 耶
四千金爸 說:
14-3-3:NR的是另一篇
四千金爸 說:
可是14-3-3有12 isoforms 喔
四千金媽 說:
一次做幾個實驗組
四千金爸 說:
除了homodimerization 外, heterodimerization 也要做
四千金媽 說:
是喔 也會 hetero 喔
四千金爸 說:
所以做完會有一個大的matrix表
四千金爸 說:
很多工作呢
四千金媽 說:
聽起來很棒 是THomAS 的idea?
四千金爸 說:
他沒想到我也會想到
四千金媽 說:
若單就 dimerization 來計算好了 你一次可做幾個實驗組
四千金爸 說:
因為construct都做了
四千金媽 說:
所以你第1,2年的耕耘沒有白費
四千金爸 說:
看protoplast抽取的量 10組左右吧
四千金爸 說:
對呀 當看到螢光時才有這種感覺
四千金爸 說:
不然就好像還在黑暗中摸索
四千金媽 說:
12+12*11/2=78組
四千金媽 說:
至少要做8次才作完
四千金媽 說:
每次要做多久
四千金爸 說:
謝謝妳幫我算好了
四千金爸 說:
快的話 抽protoplast一天, 轉基因後一天就可以看結果
四千金爸 說:
這是最快
四千金媽 說:
所以是幾天?
四千金爸 說:
目前速度2批/周
四千金媽 說:
那一個月就可以做完了 好棒耶
四千金爸 說:
理論上
四千金爸 說:
現在DNA還不夠
四千金爸 說:
努力萃取中
四千金媽 說:
miniprep?
四千金媽 說:
largeprep 吧
四千金爸 說:
有在考慮提升 但是你可以想像我有這麼多construct 假設每個都要養到250ml 我要養幾瓶
四千金爸 說:
還要incubator呢 離心機 離心瓶
四千金媽 說:
先用小試管養 再到入三角錐型瓶養阿 一種養一瓶
四千金爸 說:
是啊 光養菌就很久囉
四千金媽 說:
離心機一定有附離心瓶阿
四千金媽 說:
可是也是一勞永逸阿 否怎你老是不夠用 又要重新養菌
四千金爸 說:
所以現階段還是以mini為主 比較快 用kit
四千金媽 說:
mini一管可以用幾次實驗
四千金爸 說:
如果量多 5組左右吧
四千金媽 說:
hetero就不夠了 加上homo 你要抽3次 划算嗎
四千金爸 說:
考慮時間金錢比 應該還蠻划算的
四千金媽 說:
好啦 既然如此就乖乖做囉 嘿
四千金爸 說:
嘿
